Golpe de gracia de genes

Un golpe de gracia de genes (abreviatura: KO) es una técnica genética en la cual de los genes de un organismo se hace inoperante ("dejado pasmado" del organismo). También conocido como organismos de golpe de gracia o simplemente golpes de gracia, se usan en el aprendizaje sobre un gene que se ha ordenado, pero que tiene una función desconocida o conocida de manera incompleta. Los investigadores dibujan inferencias de la diferencia entre el organismo de golpe de gracia e individuos normales.

El término también se refiere al proceso de crear tal organismo, como en "dejar pasmado" un gene. La técnica es esencialmente la parte de enfrente de un gene knockin. El golpe de gracia a menudo se abrevia como KO. Dejar pasmado dos genes simultáneamente en un organismo se conoce como un doble golpe de gracia (DKO). De manera similar los términos que el golpe de gracia triple (TKO) y los golpes de gracia cuádruples (QKO) son usados para describir 3 o 4 dejaron pasmado genes, respectivamente.

Método

El golpe de gracia se lleva a cabo a través de una combinación de técnicas, que comienzan en la probeta con un plasmid, un cromosoma artificial bacteriano u otra construcción del ADN, y siguen al cultivo celular. Las células individuales son genéticamente transfected con la construcción del ADN. A menudo el objetivo es crear un animal transgenic que tiene el gene cambiado. De ser así, las células madre embrionarias genéticamente se transforman y se insertan en embriones prematuros. Los animales que resultan con el cambio genético de sus células germline a menudo pueden pasar entonces el golpe de gracia de genes a generaciones futuras.

Crear el musgo de golpe de gracia, transfection de protoplasts es el método preferido. Tales Physcomitrella-protoplasts transformados directamente se regeneran en plantas del musgo fértiles. Ya ocho semanas después transfection las plantas se puede proteger del apuntamiento de genes vía PCR.

La construcción se trama para combinarse de nuevo con el gene objetivo, que se lleva a cabo incorporando secuencias del propio gene en la construcción. La nueva combinación entonces ocurre en la región de esa secuencia dentro del gene, causando la introducción de una secuencia extranjera para interrumpir el gene. Con su secuencia interrumpida, el gene cambiado en mayoría de los casos se traducirá a una proteína no funcional, si se traduce en absoluto.

Un golpe de gracia condicional permite la eliminación de genes en un tejido o tiempo manera específica. Esto se hace introduciendo los sitios web loxP llamados de las secuencias cortas alrededor del gene. Estas secuencias se introducirán en la línea del germen vía el mismo mecanismo que un golpe de gracia. Esta línea del germen se puede cruzar entonces a otro germline que contiene Cre-recombinase que es una enzima viral que puede reconocer estas secuencias, los combina de nuevo y suprime el gene bordeado de estos sitios.

Como el tipo deseado de la nueva combinación del ADN es un caso raro en caso de la mayor parte de células y la mayor parte de construcciones, la secuencia extranjera elegida para la introducción por lo general incluye a un reportero. Esto permite la selección fácil de células o individuos en los cuales el golpe de gracia tenía éxito. A veces la construcción del ADN inserta en un cromosoma sin la nueva combinación homóloga deseada con el gene objetivo. Para eliminar tales células, la construcción del ADN a menudo contiene una segunda región del ADN que permite que tales células se identifiquen y se desechen.

En organismos diploid, que contienen dos alleles para la mayor parte de genes y pueden contener también varios genes relacionados que colaboran en el mismo papel, las rondas adicionales de transformación y selección se realizan hasta que cada gene apuntado se deje pasmado. Se puede requerir que la cría selectiva produzca animales de golpe de gracia homozygous.

El golpe - en es similar al golpe de gracia, pero en cambio sustituye un gene por el otro en vez de suprimirlo.

Usar

Los golpes de gracia son usados principalmente para entender el papel de un gene específico o región del ADN comparando el organismo de golpe de gracia con un wildtype con un fondo genético similar.

Los organismos de golpes de gracia también se usan como la proyección de instrumentos en el desarrollo de medicinas, para apuntar procesos biológicos específicos o carencias usando un golpe de gracia específico, o entender el mecanismo de acción de una medicina usando una biblioteca de organismos de golpe de gracia que atraviesan el genoma entero, tal como en Saccharomyces cerevisiae.

Véase también

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